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Enzymatics L6030-HC-L 說明書

更新時(shí)間：2018-04-11 點(diǎn)擊次數(shù)：4753

貨號：L6030-HC-L

品名：T4 DNA Ligase (Rapid) （T4 DNA連接酶（快速））

產(chǎn)品描述：

T4 DNA連接酶催化雙鏈DNA或RNA的末端5'磷酸和3'羥基之間形成磷酸二酯鍵。該酶有效連接鈍端和粘端，并修復(fù)雙鏈DNA，RNA或DNA / RNA雜合體中的單鏈缺口（1）。

規(guī)格：	600,000 U/ml
濃度：	240,000 U
保存：	-25°C至-15°C
純度（SDS-PAGE）	> 99％
活性：	300,000 U/mg
SS核酸外切酶	6,000 U< 1.0 % Released
DS核酸外切酶	6,000 U< 1.0 % Released
DS內(nèi)切核酸酶	6,000 U=No Conversion
大腸桿菌 DNA污染	6,000 U <10 copies

蛋白質(zhì)來源

攜帶克隆的T4 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。

提供：

10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25°C

隨附：

B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
B6030 (10X T4 DNA Ligase Buffer)

2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C

10X T4 DNA Ligase Buffer (B6030):
500mM Tris-HCI
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP
pH 7.6 @ 25°C

單位定義
1單位定義為在23℃孵育30分鐘后，在50μl1X DNA連接酶緩沖液中加入100ng具有粘性末端的DNA片段的50％所需的DNA連接酶的量。

使用說明：

1、反應(yīng)設(shè)置

Amount	Description	Final Concentration
10 uL	2X Rapid Ligation Buffer	1X
X uL	Vector	1-10 ng/uL
X uL	Insert	1-10 ng/uL
1 uL	T4 DNA Ligase (600 U/ uL)	30 U/uL
X uL	Type I Water	N/A
20 uL	Total Volume

2、過程操作

1）將所有上述組分加入干凈的反應(yīng)容器中，通過移液充分混合。

2）25°C孵育10分鐘。

3）使用PCR清潔柱立即純化DNA并洗脫約50μL。

4）- 或 - 在TE或水中立即稀釋（至少1:10，但足以使0.1-10ng連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化）

5）將0.1-10ng連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為與載體相容的化學(xué)或電子感受態(tài)細(xì)胞系

3、其他

在1X T4 DNA連接酶反應(yīng)緩沖液中用Lambda-Hind III DNA片段底物測量，一個(gè)酶酶T4 DNA連接酶粘性末端單位相當(dāng)于約3個(gè)粘性末端單位。

一個(gè)Weiss單位大約相當(dāng)于22個(gè)Enzymatics粘性末端單位。

T4 DNA連接酶是ATP依賴性的。建議在-20°C儲(chǔ)存一年后丟棄反應(yīng)緩沖液，并用新鮮緩沖液代替以確保*性能。當(dāng)靶向插入片段：載體比率在2和6之間時(shí)，單插入連接是*的。高于6：1的比率將促進(jìn)插入多個(gè)片段，而降至2：1以下將降低連接效率。

對于有問題的連接或DNA濃度未知的情況，可能需要改變比率并進(jìn)行多次連接。

高濃度PEG的存在將顯著降低電感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。為了zui大限度地轉(zhuǎn)化為電感受態(tài)細(xì)胞，建議采用以下方法：

*：連接后，使用DNA純化離心柱純化產(chǎn)物并在50μLTE中洗脫。DNA現(xiàn)在已準(zhǔn)備好轉(zhuǎn)化。要轉(zhuǎn)化的DNA的zui終數(shù)量應(yīng)該在0.1-10ng范圍內(nèi)。

更好：在ddH2O或TE中稀釋連接產(chǎn)物以降低PEG濃度。要轉(zhuǎn)化的DNA的zui終數(shù)量應(yīng)該在0.1-10ng范圍內(nèi)。

Enzymatics的高濃度T4 DNA連接酶與2X快速連接緩沖液結(jié)合使用，極大地刺激了平端連接的速度和效率，因此不建議長時(shí)間孵育（> 10分鐘），并可能大大降低連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率。為了使正確的插入/載體組合的轉(zhuǎn)化效率zui大化，推薦使用以下方案。

酶學(xué)10X T4 DNA連接酶緩沖液不含PEG，并且與標(biāo)準(zhǔn)連接方案相兼容，該方案不規(guī)定使用快速/快速/快速格式緩沖液。

部分產(chǎn)品信息：

貨號	品名	規(guī)格	濃度	品牌
N2070-10-L	ATP Solution	50 µmol	10 mM	Enzymatics
N2050-10-L	10 mM dNTP Solution Mix	100 µmol	10 mM	Enzymatics
N2010L	100 mM 75µmol dNTP Solution Set	75 µmol	100 mM	Enzymatics
N2010-A-L	100 mM dATP Solution	75 µmol	100 mM	Enzymatics
N2050L	100µmol dNTP Solution Mix	100 µmol	25 mM	Enzymatics
Y9180L	10x Uracil Cleavage System	750 Reactions	N/A	Enzymatics
P7670	2x HiFi PCR Master Mix	1 rxn	2x	Enzymatics
Y9420L	5x ER/A-Tailing Enzyme Mix	24 reactions	N/A	Enzymatics
Y9380L	E. coli Pyrophosphatase	50 U	100 U/mL	Enzymatics
Y9030L	E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein	1.5 mg	2.75 mg/ml	Enzymatics
Y9140-HC-L	End-Repair Mix (High Concentration)	75 Reactions	1 Rxn/µL	Enzymatics
Y9140-LC-L	End-Repair Mix (Low Concentration)	200 Reactions	1 Rxn/µL	Enzymatics
Y9080L	Endonuclease VIII	10,000 U	10,000 U/ml	Enzymatics
P7600L	EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-)	10,000 U	200,000 U/mL	Enzymatics
X8010L	Exonuclease I	30,000 U	20,000 U/ml	Enzymatics
X8020L	Exonuclease III	50,000 U	100,000 U/ml	Enzymatics
P7010-HC-L	Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration)	10,000 U	50,000 U/ml	Enzymatics
P7010-LC-L	Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration)	10,000 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7060L	Klenow Fragment	2,500 U	5,000 U/ml	Enzymatics
X8030L	Lambda Exonuclease	10,000 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7040L	M-MuLV Reverse Transcriptase	100,000 U	200,000 U/ml	Enzymatics
P7090L	Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-)	3,000 U	30,000 U/ml	Enzymatics
P7140-HC-L	Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration)	100,000 U	400,000 U/ml	Enzymatics
P7140-LC-L	Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration)	100,000 U	40,000 U/ml	Enzymatics
P7610L	NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions	250 Reactions	2X	Enzymatics
P7590L	Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase	500 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7460L	Poly(A) Polymerase	1,000 U	5,000 U/mL	Enzymatics
Y9260L	RecA	1.5 mg	2.0 mg/mL	Enzymatics
Y9220L	RNAse H	5,000 U	5,000 U/ml	Enzymatics
Y9240L	RNAse Inhibitor	20,000 U	40,000 U/ml	Enzymatics
L6010L	T3 DNA Ligase	900,000 U	3,000,000 U/ml	Enzymatics
L6030-LC-L	T4 DNA Ligase	150,000 U	120,000 U/ml	Enzymatics
L6030-HC-L	T4 DNA Ligase (Rapid)	240,000 U	600,000 U/ml	Enzymatics
P7080L	T4 DNA Polymerase	2,000 U	3,000 U/ml	Enzymatics
Y9130L	T4 Gene 32 Protein	1.0 mg	10 mg/mL	Enzymatics
Y9040L	T4 Polynucleotide Kinase	10,000 U	10,000 U/ml	Enzymatics
L6050L	T4 RNA Ligase 1	10,000 U	20,000 U/ml	Enzymatics
L6080L	T4 RNA Ligase 2	4,500 U	30,000 U/ml	Enzymatics
L6070L	T4 RNA Ligase 2 Truncated	500 U	5,000 U/ml	Enzymatics
L6020L	T7 DNA Ligase	900,000 U	3,000,000 U/ml	Enzymatics
P7260L	T7 DNA Polymerase	3,500 U	10,000 U/ml	Enzymatics
P7180L	T7 RNA Polymerase	50,000 U	50,000 U/ml	Enzymatics
L6060L	Taq DNA Ligase	20,000 U	40,000 U/ml	Enzymatics
P7110L	Taq DSC 2.0 DNA Polymerase	1,250 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7250L	Taq-B DNA Polymerase	10,000 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7620L	TaqIT	5,000 U	50,000 U/mL	Enzymatics
P7070L	Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT)	6,000 U	20,000 U/ml	Enzymatics
G5020L	Thermolabile UDG	500 U	1,000 U/ml	Enzymatics
Y9370L	Thermostable Pyrophosphatase	1,250 U	2,000 U/ml	Enzymatics
G5010L	Uracil DNA Glycosylase	10,000 U	2,000 U/ml	Enzymatics
P7511L	VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase	500 U	2,000 U/ml	Enzymatics
P7520L	VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase	500 U	2,000 U/ml	Enzymatics
L6030-W-L	WGS Ligase	24 Reactions	N/A	Enzymatics
P7640L	ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit	1000 Reactions	N/A	Enzymatics
P7020-HC-L	φ29 DNA Polymerase (High Concentration)	2,000 U	100,000 U/ml	Enzymatics
P7020-LC-L	φ29 DNA Polymerase (Low Concentration)	2,000 U	10,000 U/ml	Enzymatics

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